P3實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范及流程

　　BSL-3應(yīng)用于臨床、診斷、教學(xué)、研究、或者生產(chǎn)設(shè)施，在該級(jí)別中開(kāi)展有關(guān)內(nèi)源性和外源性病源的工作，若因暴露而吸入該病源。會(huì)引發(fā)嚴(yán)重的、可能致死的疾病。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)在處理致病性的和可能使人致死的病源方面受過(guò)專業(yè)訓(xùn)練，并由對(duì)該病源工作有經(jīng)驗(yàn)的、有資格的科學(xué)工作者監(jiān)督。

　　所有與傳染源操作有關(guān)的步驟，都在生物安全柜或其他物理遏制裝置中進(jìn)行，或由穿戴合適防護(hù)服及設(shè)施的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)特殊設(shè)計(jì)和施工。然而，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到現(xiàn)有有些設(shè)施，不一定滿足BSL-3的所有要求(即，雙門進(jìn)入工作區(qū)和密封問(wèn)題)。在這種情況下，在BSL-2設(shè)施中開(kāi)展常規(guī)操作(如，診斷程序中用于鑒定;分型、敏感性測(cè)試的病源繁殖)，其安全級(jí)別也可接受，但還需做到:

　　1)將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)廢氣排出室外;

　　2)實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)經(jīng)過(guò)平衡以向室內(nèi)提供定向氣流 ;

　　3)工作時(shí)，禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室;

　　4)嚴(yán)格遵照或使用BSL-3中推薦的標(biāo)準(zhǔn)微生物操作、特殊操作和安全設(shè)備。只有實(shí)驗(yàn)室主任可作出對(duì)BSL-3推薦的修訂方法進(jìn)行補(bǔ)充的決定。

　　以下的標(biāo)準(zhǔn)和特殊安全操作、設(shè)備及設(shè)施和BSL-3病源有關(guān):

　　一般操作

　　1、 實(shí)驗(yàn)時(shí)，由實(shí)驗(yàn)室主任決定限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

　　2、接觸傳染源的人員在離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室取下手套后，要洗手。

　　3、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)戴隱型眼鏡的人，也要戴眼鏡和面罩。食品要存放在工作區(qū)外專用的櫥柜和冰箱中。

　　4、不能用嘴移液，只能用機(jī)械裝置移液。

　　5、制定銳器安全使用規(guī)范。

　　6、所有的操作過(guò)程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生氣溶膠。

　　7、至少每天一次、或有活體灑出時(shí)，對(duì)工作臺(tái)面進(jìn)行消毒。

　　8、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容 器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。來(lái)自BSL-3實(shí)驗(yàn)室的傳染性廢物轉(zhuǎn)移至他處釋放前應(yīng)消毒。

　　特殊操作

　　1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的門。

　　2、實(shí)驗(yàn)室主任對(duì)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行控制，限制項(xiàng)目有關(guān)人員及輔助人員進(jìn)入。一般情況下，易感人員或感染后會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重后果的人員，不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室或動(dòng)物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危險(xiǎn)性增加。實(shí)驗(yàn)室主任對(duì)每種情況的估計(jì)和決定誰(shuí)能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室或動(dòng)物房工作，負(fù)有最終責(zé)任。未成年人不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

　　3、實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)制定規(guī)章和程序，只有告知潛在風(fēng)險(xiǎn)并符合進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室特殊要求(如，經(jīng)過(guò)免疫接種)、遵守進(jìn)出程序的人，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物房。

　　4、當(dāng)實(shí)驗(yàn)室或遏制設(shè)施中有傳染源和感染動(dòng)物時(shí)，所有實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物房入口處，應(yīng)貼有危險(xiǎn)警告標(biāo)志和常用的生物危險(xiǎn)符號(hào)，并顯示以下信息：有關(guān)病源、 實(shí)驗(yàn)室主任和有關(guān)責(zé)任人的姓名和電話表、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的特別要求(如，必須免疫、戴口罩、或采取其他的個(gè)人防護(hù)措施)。

　　5、實(shí)驗(yàn)室人員接受適當(dāng)?shù)?、和?shí)驗(yàn)室中處理或?qū)⒁幚淼牟≡从嘘P(guān)的免疫接種或測(cè)試(如，乙肝免疫接種或TB皮試)，并建議根據(jù)所處理的病源定期進(jìn)行皮試 。

　　6、適當(dāng)時(shí)，收集和儲(chǔ)存適合于所有實(shí)驗(yàn)室人員和其他有風(fēng)險(xiǎn)人員使用的基本血清樣品。根據(jù)所處理病源或?qū)嶒?yàn)室的功能，應(yīng)定期收集其他血清樣品。

　　7、實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)制定實(shí)驗(yàn)室專用生物安全手冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)操作程序中要包括生物安全預(yù)防措施。要告知實(shí)驗(yàn)人員特殊風(fēng)險(xiǎn)，實(shí)驗(yàn)人員要閱讀，并在操作和程序中遵照?qǐng)?zhí)行。

　　8、實(shí)驗(yàn)人員及其輔助人員應(yīng)接受適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)，包括和工作有關(guān)的可能存在的風(fēng)險(xiǎn)、防止暴露的必要措施和暴露評(píng)估程序。當(dāng)程序必需改變時(shí)，有關(guān)人員必須每年更新知識(shí)，接受附加培訓(xùn)。

　　9、實(shí)驗(yàn)室主任有責(zé)任確保在涉及BSL-3的微生物工作開(kāi)展之前，所有人員熟練掌握標(biāo)準(zhǔn)微生物操作及技能，熟練掌握特殊實(shí)驗(yàn)室設(shè)施的操作和運(yùn)行，其中可能包括人致病菌或細(xì)胞培養(yǎng)物處理的重要技術(shù)，或由實(shí)驗(yàn)室主任或其他熟悉于微生物安全操作及技能的、稱職的科研工作者提供的特殊培訓(xùn)課程。

　　10、必須經(jīng)常對(duì)所有污染的銳器采取高度預(yù)防措施，包括針頭和注射器、玻片、移液管、毛細(xì)管和手術(shù)刀。

　　a.針和注射器或其他銳器應(yīng)限制在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，類似灌腸、靜脈切開(kāi)放血、或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物液體吸出等，可以用其他器具的，就不要用銳器?？赡軙r(shí)，用塑料器具代替玻璃器具。

　　b.注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器(即注射器和針頭是一體的)。用過(guò)的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭 套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄 前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

　　c.適當(dāng)時(shí)，使用帶針頭套的注射器、無(wú)針頭的系統(tǒng)和其他安全設(shè)施。

　　d.打碎的玻璃器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在到掉前，應(yīng)按照地方、 州、聯(lián)邦的規(guī)定進(jìn)行消毒。

　　11、所有與傳染源有關(guān)的開(kāi)放操作，都應(yīng)在遏制設(shè)施內(nèi)的生物安全柜或其他物理遏制設(shè)備中進(jìn)行。不許在開(kāi)放的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上、并在開(kāi)放 的設(shè)施中開(kāi)展工作。用 背面為塑料質(zhì)地的紙擦拭生物安全柜內(nèi)的無(wú)孔臺(tái)面，便于清潔。

　　12、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源灑出或?yàn)R出后、或受到其他傳染源污染后，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒 。

　　a.灑出的傳染源需由專業(yè)人員、或由經(jīng)過(guò)適當(dāng)培訓(xùn)且配有裝備的處理高濃度傳染源的人員進(jìn)行消毒、處理、清洗。制定并公布可能造成濺灑的實(shí)驗(yàn)程序。

　　b.污染的設(shè)備，在離開(kāi)設(shè)施送去修理、維護(hù)或打包運(yùn)輸前，要按照地方、州或聯(lián)邦的規(guī)定消毒。

　　13、培養(yǎng)物、組織，體液標(biāo)本，或具有潛在傳染性的廢物要放入容器中，以防在收集、處理、儲(chǔ)存、運(yùn)輸或裝卸過(guò)程中泄露。

　　14、實(shí)驗(yàn)室里所有可能被污染的廢棄物品(如：手套、實(shí)驗(yàn)室外套等)，在丟棄或重新使用之前，必須經(jīng)過(guò)消毒。

　　15、灑漏或偶然事件中，明顯或可能暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀察、治療，保留書(shū)面記錄。

　　安全設(shè)備

　　l、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)，要穿上實(shí)驗(yàn)防護(hù)服，如，前襟一體或后系式大褂、干凈的外套或連褲服。不得在實(shí)驗(yàn)室外穿防護(hù)服。重復(fù)使用的衣服在清洗前要消毒，衣服被明顯污染后應(yīng)更換。

　　2、在處理傳染源、感染動(dòng)物及被污染的儀器時(shí)，必須戴手套。

　　3、建議經(jīng)常更換手套和洗手，一次性手套不能重復(fù)使用。

　　4、有關(guān)傳染源的所有操作、感染動(dòng)物的驗(yàn)尸、從感染動(dòng)物或胚胎卵采集組織或液體等，都應(yīng)在II級(jí)或III級(jí)生物安全柜中進(jìn)行。

　　5、當(dāng)操作不能在生物安全柜中進(jìn)行時(shí)，應(yīng)適當(dāng)?shù)木C合使用個(gè)人防護(hù)設(shè)施(如，口罩，面罩等)和物理遏制設(shè)施(如：帶安全罩或密封轉(zhuǎn)頭的離心機(jī))。

　　6、當(dāng)進(jìn)入內(nèi)有感染動(dòng)物的房間時(shí)，應(yīng)采取呼吸和面部保護(hù)措施。

　　實(shí)驗(yàn)室裝置

　　1、實(shí)驗(yàn)室要離開(kāi)建筑物內(nèi)的行走區(qū)，禁止隨便進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。進(jìn)入走道后，至少需要經(jīng)過(guò)兩道自動(dòng)門，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。所有的門都應(yīng)有鎖(見(jiàn)附錄F)(另發(fā))。 過(guò)道里可以設(shè)計(jì)一個(gè)更衣室。

　　2、每個(gè)實(shí)驗(yàn)室有一個(gè)洗手池，洗手池的操作應(yīng)該是免接觸式或全自動(dòng)的，洗手池應(yīng)安裝在門口附近。

　　3、處理BSL-3病源的區(qū)域，墻面、地面、天花板應(yīng)易于清洗、消毒;若有接縫，應(yīng)密封;表面應(yīng)光滑防水;對(duì)實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)試劑和消毒劑具有耐腐蝕性。地板應(yīng)整體、防滑，建議在地板凹處使用掩蔽罩。墻面、地面、天花板都不應(yīng)留有縫隙，或在設(shè)施消毒時(shí)能夠密封。

　　4、實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面應(yīng)能防水、耐熱、耐有機(jī)溶劑、耐酸堿和用于工作臺(tái)面及設(shè)施消毒的其他化學(xué)物質(zhì)。

　　5、實(shí)驗(yàn)室的操作臺(tái)應(yīng)能承受預(yù)期的重量。實(shí)驗(yàn)臺(tái)、安全柜以及設(shè)備間的空間便于打掃。實(shí)驗(yàn)室使用的椅子及其它器具，應(yīng)覆蓋易于清洗的非織物。

　　6、所有的窗門必須關(guān)閉和密封。

　　7、有實(shí)驗(yàn)垃圾處理設(shè)施及其使用方法，該設(shè)施最好設(shè)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)(即，高壓鍋、化學(xué)消毒劑、焚燒爐、其他可行的消毒方法)。應(yīng)有消毒設(shè)備使用方法。若垃圾運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)適當(dāng)密封，并不應(yīng)通過(guò)公共通道運(yùn)送。

　　8、應(yīng)配置生物安全柜，安全柜放置地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離門、房間通風(fēng)百葉窗、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)行走區(qū)。

　　9、應(yīng)有管道化的排氣系統(tǒng)，該系統(tǒng)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的風(fēng)向應(yīng)從"潔凈區(qū)"到"污染區(qū)"。排出的空氣不再循環(huán)至建筑物內(nèi)的任何其他區(qū)域。排出的空氣不需要過(guò)濾或 作其他處理，但也要依所處場(chǎng)所的要求、特殊病源操作、使用條件而定。外部排氣口要遠(yuǎn)離有人區(qū)、進(jìn)風(fēng)口，否則需經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾。實(shí)驗(yàn)人員必須證實(shí)進(jìn)入實(shí) 驗(yàn)室的風(fēng)向是正確的。建議在實(shí)驗(yàn)室的入口處設(shè)置可視的監(jiān)視裝置，表明和證實(shí)進(jìn)風(fēng)的風(fēng)向。要考慮安裝HVAC控制系統(tǒng)。防止實(shí)驗(yàn)室持續(xù)正向增壓。應(yīng)安裝 聲音報(bào)警裝置，警告實(shí)驗(yàn)人員HVAC系統(tǒng)出了問(wèn)題。

　　10、若生物安全柜至少每年經(jīng)過(guò)測(cè)試和確證，則二級(jí)生物安全柜排出的、經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾的空氣，可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室循環(huán)。當(dāng)二級(jí)生物安全柜通過(guò)建筑物排氣系 統(tǒng)排出空氣時(shí)，安全柜的排氣管路的連結(jié)，應(yīng)避免對(duì)安全柜的空氣平衡或建筑物排氣系統(tǒng)的空氣平衡產(chǎn)生干擾(如，在安全柜排氣管和排氣管道間形成空氣隙) 。當(dāng)使用三級(jí)生物安全柜時(shí)，要和排氣系統(tǒng)直接連結(jié)。若三級(jí)安全柜和供氣系統(tǒng)相連，應(yīng)避免安全柜正向增壓(見(jiàn)附A)。

　　11、會(huì)產(chǎn)生氣溶膠的連續(xù)流離心機(jī)及其他設(shè)備應(yīng)在一個(gè)裝置中，該裝置通過(guò)HEPA過(guò)濾器排出空氣，而避免直接排入實(shí)驗(yàn)室中。至少每年測(cè)試HEPA系統(tǒng)。另外，當(dāng)遠(yuǎn)離有人區(qū)或進(jìn)風(fēng)口時(shí)，該設(shè)備排出的空氣可以排到外面。

　　12、真空管路由液體消毒劑汽水閥和HEPA過(guò)濾器及類似設(shè)備保護(hù)。需要時(shí)，要更換過(guò)濾器。另外，可以使用手提真空泵(也需要由汽水閥和過(guò)濾器正確保護(hù)) 。

　　13、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)有眼睛沖洗裝置。

　　14、光線適宜于開(kāi)展所有的工作，避免反光和閃光，以免妨礙視覺(jué)。

　　15、BSL-3設(shè)施的設(shè)計(jì)和操作程序必須文件化。設(shè)施必須經(jīng)過(guò)測(cè)試以確證設(shè)計(jì)和操作參數(shù)在系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)前已達(dá)到要求。因操作經(jīng)驗(yàn)，會(huì)修改操作程序，所以設(shè) 施必須反復(fù)測(cè)試，每年至少一次。

　　16、若有關(guān)病源陳述(根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)分析、場(chǎng)所條件、其他有關(guān)法規(guī)而定)中要求，則應(yīng)采取其他環(huán)境保護(hù)措施(如，實(shí)驗(yàn)人員淋浴、排出空氣的HEPA過(guò)濾、其他 管道設(shè)施的遏制處理、液體消毒劑的供應(yīng))。